DB37/T 3821-2019 鸭新型呼肠孤病毒病诊断技术规范

ICS11.220

B41

DB37

山东省地方标准

DB37/T3821—2019

鸭新型呼肠孤病毒病诊断技术规范

Diagnostictechniquesfornovelduckreovirusdisease

2019-12-24发布2020-01-24实施

山东省市场监督管理局发布

DB37/T3821—2019

前言

本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。

本标准由山东省畜牧兽医局提出并组织实施。

本标准由山东省畜牧业标准化技术委员会归口。

本标准起草单位：山东省农业科学院家禽研究所。

本标准主要起草人：于可响、宋敏训、李玉峰、马秀丽、刘存霞、姜亦飞、胡峰、亓丽红、黄兵、

郭效珍、刘玉山。

I

DB37/T3821—2019

鸭新型呼肠孤病毒病诊断技术规范

1范围

本标准规定了鸭新型呼肠孤病毒病的临床诊断、实验室诊断和综合判定技术规范。

本标准适用于鸭新型呼肠孤病毒病的诊断和流行病学调查。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB19489实验室生物安全通用要求

NY/T541兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

鸭新型呼肠孤病毒病

又称“肉鸭脾坏死症”、“番鸭出血性坏死性肝炎”，是由鸭新型呼肠孤病毒引起的多品种雏鸭脾

脏出血和坏死为主要特征的疾病。该病毒在血清学和基因序列上与原有的番鸭呼肠孤病毒有明显差异。

4临床诊断

4.1流行病学

该病一年四季均可发生，不同品种的鸭均可发病，如樱桃谷鸭、麻鸭、番鸭、半番鸭等；发病日龄

一般为5～25日龄，其中以5～10日龄居多，病程5～7天。

4.2临床症状

病鸭精神沉郁，发育不良，部分拉白色稀粪，一般不会出现神经症状，容易继发鸭疫里默氏杆菌、

大肠杆菌等细菌感染。发病率5%～35%，死亡率20%以下。

4.3病理变化

脾脏表面出血或坏死是其主要病变特征。

4.4结果判定

1

DB37/T3821—2019

符合4.1流行病学特征，病鸭出现4.2临床症状和4.3病理变化，可判为鸭新型呼肠孤病毒病疑似病

例，应进行实验室确诊。

5实验室诊断

除非另有规定，实验室诊断所用化学试剂均为分析纯；试验用水符合GB/T6682二级水的规定；实

验室生物安全要求按照GB19489执行。

5.1病原分离鉴定

5.1.1仪器和设备

5.1.1.1高速冷冻离心机。

5.1.1.2恒温培养箱。

5.1.2试剂或材料

5.1.2.1青链霉素（青霉素10000IU/mL，链霉素10000µg/mL）。

5.1.2.20.22µm微孔滤器。

5.1.2.38日龄～9日龄鸭新型呼肠孤病毒抗体阴性鸭胚。

5.1.3病料处理

按NY/T541要求无菌采集发病鸭的脾脏1g～2g，加入10倍体积生理盐水和终浓度2000IU/mL的

青链霉素，剪碎后充分研磨，反复冻融2次～3次，8000×g离心20min，取上清液用0.22µm微孔滤器

过滤，经菌检无菌后用于病原分离。

5.1.4操作步骤

5.1.4.1取5.1.3中处理好的上清液经尿囊腔接种8日龄～9日龄鸭新型呼肠孤病毒抗体阴性鸭胚，

0.1mL/枚，共5枚。封口后置于37℃恒温箱继续孵化，每日照胚两次，记录鸭胚死亡情况，观察到

第6天。

5.1.4.2弃掉接种后24h内死亡的鸭胚，若接种6天内鸭胚出现死亡，则收集死亡鸭胚的尿囊液，用

5.2、5.3、5.4中的任意一种方法进行鉴定；若接种6天内鸭胚不出现死亡，则收集6天活胚的尿囊液，

用5.2、5.3、5.4中的任意一种方法进行鉴定。

5.1.5结果判定

5.1.5.1阳性：接种后死亡鸭胚或接种后6天活胚的尿囊液用5.2、5.3、5.4中的任意一种方法检测

为阳性。

5.1.5.2阴性：接种后死亡鸭胚或接种后6天活胚的尿囊液用5.2、5.3、5.4中的任意一种方法检测

为阴性。

5.2RT-PCR方法

5.2.1仪器和设备

5.2.1.1高速冷冻离心机。

5.2.1.2PCR扩增仪。

5.2.1.3电泳仪。

2

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5.2.1.4紫外分析仪。

5.2.2试剂或材料

5.2.2.1TRIZol。

5.2.2.2无RNA酶水。

5.2.2.3反转录酶M-MLV。

5.2.2.4RNA酶抑制剂。

5.2.2.5Taq酶。

5.2.2.6琼脂糖。

5.2.2.7GoldviewDNA染料。

5.2.2.8阳性参照物（鸭新型呼肠孤病毒）。

5.2.2.9阴性参照物（阴性尿囊液）。

5.2.3操作步骤

5.2.3.1样品处理

按NY/T541要求无菌采集发病鸭的脾脏1g～2g，加入10倍体积生理盐水，用剪刀剪