DB33/T 2481-2022 畜禽排泄物中磺胺类药物残留量的测定 液相色谱-串联质谱法

ICS65.020.30

CCSB40

33

浙江省地方标准

DB33/T2481—2022

畜禽排泄物中磺胺类药物残留量的测定

液相色谱-串联质谱法

Determinationofsulfonamidesresiduesinlivestockandpoultryexcreta

—Liquidchromatography–tandemmassspectrometry

2022-04-16发布2022-05-16实施

浙江省市场监督管理局发布

DB33/T2481—2022

前言

本标准按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定

起草。

请注意本标准的某些内容可能涉及专利。本标准的发布机构不承担识别专利的责任。

本标准由浙江省农业农村厅提出并组织实施。

本标准由浙江省畜牧兽医和饲料标准化技术委员会归口。

本标准起草单位：浙江省动物疫病预防控制中心、绿城农科检测技术有限公司。

本标准主要起草人：黄娟、裘丞军、王彬、罗成江、陈洁、侯轩、陈晓林、阮鑫、周蕾、赵月均、

任玉琴。

I

DB33/T2481—2022

畜禽排泄物中磺胺类药物残留量的测定

液相色谱-串联质谱法

1范围

本标准规定了畜禽排泄物中磺胺醋酰、磺胺吡啶、磺胺嘧啶、磺胺甲噁唑、磺胺噻唑、磺胺甲基嘧

啶、磺胺二甲噁唑、磺胺异噁唑、磺胺甲噻二唑、苯甲酰磺胺、磺胺二甲嘧啶、磺胺异嘧啶、磺胺对甲

氧嘧啶、磺胺甲氧哒嗪、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺氯哒嗪、磺胺喹噁啉、磺胺邻二甲氧嘧啶、磺胺间二甲

氧嘧啶、磺胺苯吡唑的液相色谱-串联质谱测定方法。

本标准适用于畜禽排泄物中上述20种磺胺类药物残留量的测定。

本标准的检出限为2g/kg，定量限为5g/kg。

注：畜禽排泄物包括畜禽排泄的粪便或粪便和尿液的混合物。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过规范性文件的引用而构成本标准必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本标准；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本

标准。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB/T25169畜禽监测技术规范

3术语和定义

本标准没有需要界定的术语和定义。

4原理

试样中残留的磺胺类药物经酸化乙腈溶液提取，氮气吹干后用磷酸盐溶液复溶，固相萃取柱净化，

液相色谱-串联质谱仪测定，基质匹配标准曲线校准，外标法定量。

5试剂或材料

除非另有规定，均使用分析纯试剂。

5.1水：GB/T6682，一级。

5.2甲醇（CH3OH）：色谱纯。

5.3正己烷（C6H14）。

5.490%酸化乙腈溶液：取900mL乙腈，加冰乙酸10mL，加水稀释至1000mL，混匀。

5.50.05mol/L磷酸盐溶液：取1.48g磷酸二氢钠和14.50g磷酸氢二钠，加水溶解稀释至1000mL,

混匀。

5.65%甲醇溶液：取50mL甲醇，加水稀释至1000mL，混匀。

5.75%氨化甲醇：取5mL氨水，加甲醇稀释至100mL，混匀。

1

DB33/T2481—2022

5.80.1%甲酸溶液：取1.0mL甲酸，加水稀释至1000mL，混匀。

5.9乙腈甲酸溶液：取10mL乙腈，用0.1%甲酸溶液稀释至100mL，混匀。

5.100.1%甲酸甲醇溶液：取1.0mL甲酸，加甲醇稀释至1000mL，混匀。

5.11磺胺类标准品：各标准品信息见附录A，纯度≥95%。

5.12标准贮备溶液(1mg/mL)：分别称取磺胺类标准品（5.11)约10mg（准确至0.01mg），分别置10

mL棕色容量瓶中，用甲醇（5.2）溶解并定容至刻度，混匀。-20℃以下保存，有效期6个月。

5.13混合标准中间溶液Ⅰ(10g/mL)：分别吸取标准贮备溶液（5.12）各1.00mL，置于100mL棕色

容量瓶中，用甲醇（5.2）稀释至刻度，混匀，-20℃以下保存，有效期1个月。

5.14混合标准中间溶液Ⅱ(250ng/mL)：准确吸取混合标准中间溶液Ⅰ（5.13）250L，置于10mL棕

色容量瓶中，用乙腈甲酸溶液（5.9）稀释至刻度，混匀，现用现配。

5.15系列混合标准工作溶液：准确吸取混合标准中间溶液Ⅱ（5.14）适量，用乙腈甲酸溶液（5.9）

稀释成浓度为2.0ng/mL、5.0ng/mL、25.0ng/mL、50.0ng/mL、100.0ng/mL、250.0ng/mL的系列标准

工作溶液，现用现配。

5.16N-乙烯吡咯烷酮和二乙烯基苯混合固相萃取柱（HLB）：60mg/3mL或性能相当者。

5.17微孔滤膜：0.22m，水系。

6仪器设备

6.1液相色谱－串联质谱仪：配有电喷雾离子源。

6.2分析天平：感量0.01mg、0.01g。

6.3真空冷冻干燥机：冷阱温度-50℃，真空度10Pa。

6.4离心机：转速不低于10000r/min。

6.5氮吹仪。

6.6固相萃取装置。

6.7振荡仪。

6.8涡旋混合器。

6.9超声提取仪。

6.10样品粉碎设备。

6.11分析筛：0.5mm孔径。

7样品制备与保存

按照GB/T25169采集畜禽排泄物，用四分法缩减至约200g，-40℃以下真空冷冻干燥24h，使样品

中的水分在10%以下，粉碎，过0.5mm孔径的分析筛（6.11），装入密闭容器中，于-20℃以下保存备

用。

取不含待测磺胺类药物的样品适量，按上述方法制备，作为空白试样。

8测定步骤

8.1试样溶液制备

8.1.1提取

2

DB33/T2481—2022

将装有试样的密闭容器取出，放至室温。称取试样约2g（精确到0.01g），置于50mL离心管中，

准确加入90%酸化乙腈溶液（5.4）10.0mL，涡旋使试样分散，振荡10min，超声提取10min，10000r/min

离心5min。准确移取上清液2mL，置于10mL试管中，加入0.05mol/L磷酸盐溶液（5.5）1mL，混匀，

于30℃水浴中氮气吹至残余物小于1mL。再加入0.05mol/L磷酸盐溶液（5.5）3mL、正己烷（5.3）2mL，

涡旋1min、超声2min，使残余物溶解，静置分层或10000r/min离心2min，取下层水相备用。

8.1.2净化

取HLB固相萃取柱（5.16），依次用甲醇5mL和水5mL活化，取全部备用液（8.1.1）过柱，控制流

速在1.0mL/min以下，依次用水3mL，5%甲醇溶液（5.6）3mL淋洗，抽干。用5%氨化甲醇（5.7）3mL

洗脱，收集洗脱液，30℃水浴中氮气吹干，加乙腈甲酸溶液（5.9）1.00mL，超声2min、涡旋60s使残

余物溶解，溶液经0.22m微孔滤膜（5.17）过滤，上机测定。

8.2基质匹配混合标准曲线的制备

称取空白试样约2g（精确至0.01g），按8.1步骤操作，氮气吹干后分别准确加入系列混合标准工

作溶液（5.15）1.00mL，混合溶解后经微孔滤膜（5.17）过滤，制成2.0ng/mL、5.0ng/mL、25.0ng/mL、

50.0ng/mL、100.0ng/mL、250.0ng/mL的基质匹配系列标准溶液，用液相色谱－串联质谱仪测定。以

特征离子质量色谱峰面积为纵坐标、标准工作溶液浓度为横坐标，绘制基质匹配标准曲线，求回归方程

和相关系数。

8.3液相色谱-质谱参考条件

8.3.1液相色谱参考条件

色谱柱：C18柱，柱长50mm，内径2.1mm，粒度1.7m，或性能相当者。

柱温：35℃。

进样量：5L。

流动相：A：0.1%甲酸溶液（5.8）；B：0.1%甲酸甲醇溶液（5.10），梯度洗脱程序见表1。

表1梯度洗脱程序

时间流速AB

minmL/min%%

0.00.3955

2.00.38515

5.00.36040