GB/T 13087-1991 饲料中异硫氰酸酯的测定方法

中华人民共和国国家标准

饲料中异硫氮酸醋的测定方法GB13087一91

Methodfordeterminationofisothiocyanates

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，主题内容与适用范困

本标准规定了配合饲料和菜籽饼粕中异硫氰酸醋的测定方法。

本标准适用于配合饲料(包括混合饲料)和菜籽取油后的饼粕中异硫氰酸醋的测定。

第一篇气相色谱法

2原理

配合饲料中存在的硫葡萄搪昔，在芥子酶作用下生成相应的异硫氰酸酷，用二氯甲烷提取后再用气

相色谱进行测定。

3试剂和溶液

除特殊规定外，本标准所用试剂均为分析纯，水为蒸馏水或相应纯度的水。

3.1二氯甲烷或氯仿(GB682).

3.2丙酮(GB686),

3.3pH7缓冲液:市售或按下法配制。量取35.3mLO.1mol/L柠檬酸(C6He0c"H20)溶液，置入200mL

定容瓶中，用0.2mol/L磷酸氢二钠(Na2HPO,"12H20,GB1263)稀释至刻度，配制后检查pH值。

3.4无水硫酸钠。

15酶制剂:将白芥(SinapisalbaL.)种子((72h内发芽率必须大于85，保存期不超过两年)粉碎

后，称取100g，用300mL丙酮(3.2)分10次脱脂，滤纸过滤，真空干燥脱脂白芥子粉，然后用400mL水

分两次提取脱脂粉中的芥子酶，离心，取上层混悬液体，合并，于合并混悬液中加入400mL丙酮(3.2)沉

淀芥子酶，弃去上清液，用丙酮(3.2)洗沉淀5次，离心，真空干燥下层沉淀物，研磨成粉状，装入密闭容器

中，低温保存备用，此制剂应不含异硫氰酸醋。

3.6丁基异硫氰酸酷内标溶液:配制0.100mg/mL丁基异硫氰酸酷CCH,(CH2),NCS〕二氯甲烷或氯

仿((3.1)溶液，贮于4'C，如试样中异硫氰酸酷含量较低，可将上述溶液稀释，使内标丁基异硫氰酸醋峰面

积和试样中异硫氰酸酷峰面积相接近。

4仪器、设备

41气相色谱仪:具有氢焰检测器。

42氮气钢瓶:其中氮气纯度为99.99000

43.微量注射器:5pL,

44分析天平:感量。.0001g.

国家技术监督局1991一07门6批准1992一04一01实施

GB13087一91

4.5实验室用样品粉碎机。

4.6振荡器(往复，200次/min).

4.7具塞锥形瓶，25mLe

4.8离心机。

4.9离心试管:10ml,.

5试样制备

采集具有代表性的配合饲料样品，至少2kg，四分法缩分至约250g，磨碎，过1mm孔筛，混匀，装入

密闭容器，防止试样变质，低温保存备用。

6测定步获

6.1试样的酶解

称取约2.2g试样于具塞锥形瓶((4-7)中，精确到0.001g，加入5mLpH7缓冲液((3.3),30mg酶制

剂((3.5),10mL丁基异硫佩酸醋内标溶液(3.6)，用振荡器((4-6)振荡2h，将具塞锥形瓶(4-7)中内容物

转入离心试管((4-9)中，离心机((4-8)离心，用滴管吸取少量离心试管((4-9)下层有机相溶液，通过铺有少

量无水硫酸钠(3-4)层和脱脂棉的漏斗过滤，得澄清滤液备用。

6.2色谱条件

6.2-1色谱柱:玻璃，内径3mm，长2m,

6.2.2固定液:20%FFAP(或其他效果相同的固定液).

6.2.3载体:ChromosorbW,HP,80-100目(或其他效果相同的载体)。

6.2.4柱温:loo0C。

6.2.5进样口及检测器温度:1500C,

6.2.6载气(氮气)流速:65mL/min,

6.3测定

用微量注射器((4.3)吸取1一2pL上述澄清滤液，注入色谱仪，测量各异硫氛酸酷峰面积。

7测定结果

不，计算公式