DB13/T 5145-2019 鸡肉、鸭肉中金刚烷胺、金刚乙胺、索金刚胺残留检测方法 酶联免疫吸附法

ICS65.020.30

B43

DB13

河北省地方标准

DB13/T5145—2019

鸡肉、鸭肉中金刚烷胺、金刚乙胺、索金刚

胺残留检测方法酶联免疫吸附法

2019-12-27发布2020-01-28实施

河北省市场监督管理局发布

DB13/T5145—2019

前言

本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。

本标准由河北省农业农村厅提出。

本标准起草单位：河北省兽药监察所、河北英茂生物科技有限公司、北京维德维康生物技术有限

公司、秦皇岛市农产品质量安全监督检验中心、承德市畜禽水产品质量检验监测中心、石家庄市畜产

品质量监测中心、唐山市食品药品综合检验检测中心、邢台市动物卫生监督所、邢台市农业农村局、

邢台市畜牧站。

本标准主要起草人：王萍、刘怡菲、翟明成、李研东、闫超、李海龙、马立才、张嘉楠、刘力、

李云、崔沙沙、赵芳、武侠均、钱春彩、左佳、孟令庄、李文香、李肖莉、陈宝明。

I

DB13/T5145—2019

鸡肉、鸭肉中金刚烷胺、金刚乙胺、索金刚胺残留检测方法酶联

免疫吸附法

1范围

本标准规定了鸡肉、鸭肉中金刚烷胺、金刚乙胺、索金刚胺残留量酶联免疫吸附（ELISA）法的制

样和检测方法。

本标准适用于鸡肉、鸭肉中金刚烷胺、金刚乙胺、索金刚胺残留量的快速筛选测定。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的文件，仅注日期的版本适用于本文件。

凡是不注的日期的引用文件，其最新版本（包括所有修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

3制样

3.1样品的制备

取新鲜或冷冻的空白或供试组织，去除脂肪和筋膜，绞碎均质。

3.2样品的保存

-20℃以下贮存，保存期6个月。

4测定方法

4.1原理

本方法的测定原理是竞争性酶联免疫反应。酶标板微孔上预包被有偶联抗原，加标准品或待测样

品后，再加抗金刚烷胺抗体，包被抗原与加入的标准品或待测样品竞争抗体，通过洗涤除去游离的抗

原、抗体及抗原抗体结合物。再加入酶标记物，酶标记物与抗体结合。加入底物液后，结合到板上的

酶标记物使底物显色。加终止液，用酶标仪测量微孔溶液的吸光度值，金刚烷胺浓度与吸光度值成负

相关，按绘制的校正曲线定量计算。

4.2试剂和材料

以下所用试剂，除特殊注明外均为分析纯，水为符合GB/T6682规定的二级水。

a)乙腈；

b)正己烷；

c)金刚烷胺类药物试剂盒，组成见附录B；

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DB13/T5145—2019

d)样品稀释工作液：用水将浓缩样品稀释液（附录B.7）按1：19体积比进行稀释，混匀后备

用；

e)洗涤工作液：用水将浓缩洗涤液（附录B.8）按1：19体积比进行稀释，混匀后备用。

4.3仪器和设备

a)分析天平：感量0.01g；

b)旋涡振荡器；

c)离心机：转速4000rpm以上；

d)氮气吹干仪；

e)酶标仪（配备450nm、630nm滤光片）；

f)单道微量移液器：20μL～200μL，100μL～1000μL和1mL～5mL；

g)多通道微量移液器：50μL～300μL；

h)恒温箱；

i)计时器：精确到秒；

j)离心管：15mL、50mL。

4.4测定步骤

4.4.1试料的制备

试料的制备包括：

——取制备后的供试样品，作为供试试料；

——取制备后的空白样品，作为空白试料；

——取制备后的空白样品，添加适宜浓度的标准溶液作为空白添加试料。

4.4.2试样提取、净化

准确称取试样3g±0.05g于50mL离心管中，加入50μL样品提取剂、6.0mL乙腈，充分涡动2min；

室温（25℃±5℃）下4000rpm离心5min；取3.0mL上清液于15mL干净离心管中；60℃～70℃水浴

氮气吹干；