DB63/T 1714-2018 宁夏枸杞组织培养育苗技术规范

ICS65.020.01

B61

DB63

青海省地方标准

DB63/T1714—2018

宁夏枸杞组织培养育苗技术规范

2018-12-26发布2019-03-20实施

青海省市场监督管理局发布

DB63/T1714—2018

前言

本标准的编写符合GB/T1.1-2009给出的规则。

本规范由中国科学院西北高原生物研究所提出并归口。

本规范起草单位:中国科学院西北高原生物研究所。

本标准起草人：王莉、李毅、胡延平、王溪、王建科、王均、石琳、杨文韬。

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DB63/T1714—2018

宁夏枸杞组织培养育苗技术规范

1范围

本标准规定了宁夏枸杞（LyciumbarbarumL.）组织培养快繁育苗中的术语和定义、一般要求，描

述了前期准备、外植体处理和培养方法，给出了宁夏枸杞组织培养育苗不同阶段的技术内容。

本标准适用于宁夏枸杞组织培养育苗。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T603化学试剂试验方法中所用制剂及制品的制备

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

LY/T1882林木组织培养育苗技术规程

3术语与定义

下列术语和定义适用于本文件，本标准使用的其它术语、定义见附录A规定。

3.1

不定苗adventitiousshoots

离体条件下由植物器官或组织形成的苗。

3.2

再生植株Plantlet

不定苗生根后形成的完整植株。

3.3

预培养pre-culture

在对外植体进行诱导培养前，先在无激素或无附加物的培养基上进行的第一个培养过程。

4一般要求

4.1本标准所使用的试剂纯度不低于附录B的规定。

4.2在配制溶液和培养基母液时使用不低于GB/T6682规定的二级水，配制培养基使用不低于三级水。

当溶液、母液和培养基等出现浑浊、沉淀或出现微生物污染时，须重新配制。

4.3本标准中所用溶液以%表示的，除乙醇为体积分数外，均为质量分数。

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DB63/T1714—2018

5前期准备

5.1培养基母液配制

依据改良MS培养基的组成，即附录C的规定。按照10倍量配制大量元素母液，按照100倍量配制微量

元素母液和有机元素母液，按照200倍量配制铁盐母液。将配制好的母液分别装入玻璃瓶中，铁盐母液

须使用棕色玻璃瓶，分别贴上标签，注明母液名称、配制倍数及日期，贮存在2℃～4℃的冰箱中。

5.2植物生长调节剂配制

植物生长调节剂选用附录B，单独配成0.1mg/ml的溶液。分别贴上标签，注明名称、配制浓度和日

期，贮存在2℃～4℃的冰箱中。

5.3其他试剂配制与使用

5.3.1分别配制0.1%的氯化汞、70%乙醇、10mg/ml柠檬酸钠、10mg/mlL-抗坏血酸和10mg/ml肌

醇、1M氢氧化钠和1M盐酸溶液，分别贴上标签，注明名称、配制浓度和日期，贮存在2℃～4℃的冰

箱中。

5.3.2蔗糖和酸水解酪素按照培养基配方直接称量。

5.3.3琼脂粉用量每批次需进行预备试验确定，在培养基中的最终浓度在0.27%～1.30%之间。

5.4培养基配方

按照培养的目标和不同阶段，培养基分为预培养基、诱导培养基、增殖培养基和生根培养基，其配

方如下：

——预培养基：MS基础培养基+6-BA0.2mg/L～0.3mg/L+2,4-D2.0mg/L+CH300mg/L+Vc2.0mg/L+

蔗糖3%+琼脂粉；

——诱导培养基：MS基础培养基+6-BA3.0mg/L+NAA0.0mg/L～2.0mg/L+CH300mg/L+Vc2.0mg/L+

蔗糖3%+琼脂粉；

——增殖培养基：MS基础培养基+6-BA0.0mg/L～1.0mg/L+CH300mg/L+Vc2.0mg/L+蔗糖3%+琼

脂粉；

——生根培养基：MS基础培养基+6-BA0.0mg/L～1.0mg/L+CH300mg/L+蔗糖3%+琼脂粉。

5.5培养基的制备

培养基按照LY/T1882之4.2.1的方法，并依据本标准附录C和5.4的配方要求配制，pH调整为5.6～

5.8。灭菌、保存按照LY/T1882之4.2.2和4.2.3的方法。

6外植体处理方法

6.1外植体的获取

每年5月～7月剪取无病、虫危害当年生嫩枝条。

6.2外植体消毒

将去除叶片的嫩枝用流水冲洗干净后，剪成包含2个～3个叶腋的段，在超净工作台上用70%的酒精

漂洗茎段30s，再用0.1%的氯化汞消毒8min～10min，最后用无菌水冲洗4次～6次。

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DB63/T1714—2018

7培养方法与程序

7.1外植体预培养

将无菌茎段接种于预培养基上，茎段下端应插入培养基。在温度为22℃～25℃，光照强度2000

Lux～3000Lux光照条件下培养2周。

7.2腋芽诱导培养

将深绿色、表面膨大、切口处有淡黄色愈伤组织出现的茎段外植体平放到诱导培养基上，茎段平放

入培养基上，在温度22℃～25℃、光照强度2000Lux～3000Lux、光照时间12h/d～14h/d的条件

下培养2周～3周，形成腋芽。

7.3不定苗诱导分化培养

将新形成的腋芽切下，转接至诱导培养基上，在温度为22℃～25℃，光照强度3000Lux～5000Lux、

光照时间14h/d～16h/d的条件下培养。培养3周～4周后，腋芽在基部、叶腋处形成不定芽，逐渐生长

形成不定苗及不定苗丛。

7.4不定苗增殖培养

将生长至1.0cm～2.0cm的丛生不定苗从基部进行分割，转接于增殖培养基中。在温度22℃～25℃，

光照强度为5000Lux～10000Lux、光照时间为14h/d～16h/d条件下培养4周。高度不足2.0cm的不定

苗继代到增殖培养基培养，高度大于2.0cm的不定苗进行生根培养。

7.5生根培养

将高度大于2.0cm丛生苗进行单株分离，视高度切段2.0cm～3.0cm后接种到生根培养基中，在温

度22℃～25℃，光照强度3000Lux～5000Lux、光照时间为16h/天的条件下进行培养10d～14d，

基部生长出健壮根，形成再生植株后进行移栽。

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