GB/T 36849-2018 五彩苏类病毒检疫鉴定方法

ICS65.020.01

B16

中华人民共和国国家标准

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GBT368492018

五彩苏类病毒检疫鉴定方法

DetectionandidentificationofColeusblumeiviroids

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2018-09-17发布2019-04-01实施

国家市场监督管理总局

发布

中国国家标准化管理委员会

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GBT368492018

前言

本标准按照/—给出的规则起草。

GBT1.12009

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Ⅰ

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GBT368492018

五彩苏类病毒检疫鉴定方法

1范围

本标准规定了五彩苏类病毒的检疫鉴定方法。

本标准适用于可能带有五彩苏类病毒的五彩苏的检疫鉴定。

2基本信息

:

中文名称五彩苏类病毒

学名:

Coleusblumeiviroid

缩写:

CbVd

:

异名锦紫苏类病毒

:()()。

分类地位马铃薯纺锤块茎类病毒科Posiviroidae锦紫苏类病毒属Coleviroid

p

五彩苏类病毒的其他信息参见附录A。

3方法原理

根据CbVd基因组RNA自然状态和变性后的不同结构分子在聚丙烯酰胺凝胶电泳中迁移率的差

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(,);

异进行往复双向聚丙烯酰胺凝胶电泳return-olacrlamideelelectrohoresisR检测根据

pyygp

(),。

其核酸序列的特异性进行逆转录聚合酶链式反应RT-PCR通过电泳条带大小进行结果判定

、

4仪器设备用具及试剂

4.1仪器设备

()、、、、、、

电子分析天平0.001g垂直电泳槽小型离心机台式冷冻离心机普通PCR仪电泳系统

、、、、、、、、

pH计凝胶成像系统4℃冰箱超净工作台-80℃超低温冰箱高压灭菌锅制冰机涡旋振荡器微

波炉等。

4.2用具

(、、、、)、、(、、)

可调移液器2.5L10L20L100L1000L吸头离心管0.2mL0.5mL1.5mL及研

μμμμμ

钵等。

4.3试剂

,。

除有特殊说明外所有实验用试剂均为分析纯或生化试剂

试剂见附录;试剂见附录。

RBRT-PCRC

5检测方法

5.1R检测

R检测见附录B。

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5.2RT-PCR检测

RT-PCR检测见附录C。

6结果判定

,;,

样品经和两种方法检测为阳性即可判定样品带有若结果为阳性其产物

5.15.2CbVdRT-PCR

,。

测序比对也为阳性可判定样品带有CbVd

7样品保存与结果记录

7.1样品保存

,,。

结果判定为阳性的样品应妥善保存并作好登记和标记以备复核用种子样品可保存在室温干燥

;。

环境中叶片样品保存在-80℃冰箱中

7.2结果记录

:、、、、、,

完整的实验记录要包括样品的来源种类时间实验检测时间地点方法和结果并有实验人员

的签字等;测定需有银染色结果图片,检测需有电泳结果图片。

RRT-PCR

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2

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附录

A

()

资料性附录

五彩苏类病毒相关资料

A.1寄主范围

仅限于五彩苏()。

Coleusblumei

A.2地理分布

、、、、、、、。

巴西德国加拿大日本中国韩国印度印度尼西亚

A.3传播途径

,;“”,

可通过种子传播种传率一般为16%~68%在品种RuhmvonLuxembur的五彩苏上CbVd-1

g

的种传率甚至可以高达100%。也可通过花粉传播。

A.4病害症状

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、;

不同品种的五彩苏上可引起植株矮化叶色斑驳等不同的症状在某些品种的五彩苏上也可能呈潜

伏侵染。

A.5基因组特征

,(),

五彩苏类病毒包括种分别为五彩苏类病毒五彩苏类病毒均为共价

6-1~-6CbVd-1~CbVd-6

;(,

闭合环状的单链RNA分子六种五彩苏类病毒具有共同的中央保守区centralconservedreion

g

),,,,,,,

CCRCbVd-1~CbVd-6的大小分别为250b301b364b295b274b342b两两之间的序

pppppp

列相似性()见表A.1。

%

表A.1六种五彩苏类病毒中央保守区序列相似性

CbVdsCbVd-1CbVd-2CbVd-3CbVd-4CbVd-5CbVd-6

CbVd-1100%57.95%34.32%56.39%50.35%38.3%

CbVd-2—100%64.11%41.25%52.13%72.51%

CbVd-3——100%61.58%38.19%70.