GB/T 27858-2011 化学品 沉积物-水系统中摇蚊毒性试验 加标于水法

ICS13．300

A80

语亘

中华人民共和国国家标准

27858--2011

GB／T

口

化学口口沉积物一水系统中摇蚊毒性试验

加标于水法

chironomidwatermethod

Chemicals--Sediment-water

toxicitytest--Spiked

201

1-12-30发布

宰瞀髅紫瓣警糌瞥星发布中国国家标准化管理委员会“”。

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27858--2011

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waterwaterwaterwateror3．13．23．33．427858--201sediment1

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227858--2011d～23d～65cm2～3

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9．1327858--2011

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验浓度的个数增加时，可以减少每个浓度的平行试样的个数。增加平行试样个数或减小试验浓度的间

隔可减小试验结果的置信区间。如果需要评估幼虫10d的存活和生长情况，则需增加额外的平行

试样。

9．3评估NOEC／LOEC的设计

Bonferroni修正)或者Mantel-Haentzal检验。

9．4限度试验

如果在探寻浓度范围的预试验中没有观测到任何效应，则应进行限度试验(一个试验浓度和一个对

照浓度)。限度试验的目的就是在一个足够高的浓度下进行试验，以使决策者能够排除该物质可能产生

000

的毒性效应。限度值设定在一个预期在任何情况下都不会出现的浓度。推荐浓度为1mg／kg(干

重)。试验和对照各需至少6个平行试样。应证明试验有足够的统计效能，能够在5％的显著水平上

的要求(正态，齐性方差)，则t检验是一种合适的统计方法。如果数据不能满足这些要求，可以应用方

检验。

10试验步骤

10．1暴露条件

10．1．1加标水一沉积物系统的制备

10．1．1．1向试验容器中加入适当数量的配制沉积物，形成厚度至少1．5em深

am的一层，然后加入6

度的水。沉积物厚度与水深之比不应超过1：4，沉积层厚度不应超过3cm。加入受试生物之前，沉积

物一水系统应进行7d的柔和通风(见附录B)。在向水柱体中加入试验溶液时，为了避免沉积物分层和

再次激起微小颗粒悬浮在水中，可在沉积物上盖一个塑料片，把溶液倒在塑料片上然后迅速将塑料片移

开。也可以用其他合适的器具。

10．1．1．2应在试验容器上加一个玻璃盘之类的盖子。必要时，试验过程中可加水使水深超过初始的

体积以补偿水分的挥发。只能加入蒸馏水或电离水以避免盐分浓度增加。

10．1．2加入受试生物

10．1．2．1在向试验容器中加人受试生物的4d--5

d前，应将卵块从培养器中取出，移至加了培养介

质的小容器中。可使用培养器中现成的已陈化介质，也可用新配制的介质。如果用后者，应向培养介质

中加入绿藻，和／或几小滴将切片鱼食磨细后的悬浮液的滤出液。只能使用刚刚产出的卵块。正常情况

下，卵出生2d～3d～3

d后幼虫就开始孵化(C．riparius，温度20℃情况下2

况下ld～4d～4d～8

d；C．yoshimatsui，温度25℃情况下1d)，幼虫至成虫共生长四龄，每龄4d。用

d～3d～4

于试验的是一龄幼虫(孵出后2d或1d)。幼虫处于哪一龄可通过测量其头壳宽度来确定。

10．1．2．2用一根钝头吸管将20只一龄幼虫随机放入每一个已加人加标水和沉积物的试验容器中。

向试验容器加入幼虫时停止通风，加入后再保持24h。每种浓度所加入的幼虫数量根据所使用的不同

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的试验方法而定，用EC点估算法时每种浓度至少60只，而用NOEC测定法则至少为80只。

10．1．2．3加入幼虫24h后，将受试物质加入上部的水柱体中(用吸管向水面下注入少量的受试物质

溶液)，再次给予轻微的通风，以小心混合上部水体，注意不要搅起沉积物。

10．1．8试验浓度

10．1．3．1为了选定正式试验的浓度范围，可进行浓度范围的预试验；为此，需要使用一系列间隔较大

的受试物质浓度。在与正式试验相同的摇蚊表面密度条件下，将摇蚊暴露于每一种试验物质浓度中一

段时间，这样即可估算出适当的试验浓度。浓度范围的探寻试验不需要平行试样。

10．1．3．2正式试验用的试验浓度是根据探寻浓度范围的预试验的结果来决定，至少要选用5组浓度。

浓度的选定应与9．2和9．3的要求相符。

10．1．4对照

试验时要准备好对照容器，这些容器中不加入受试物质，但要加入沉积物。对照容器也要备好适当

数量的平行试样(参见9．2和9．3)。如果在8．5使用了某种溶剂，则要增加沉积物溶剂对照。

10．1．5试验系统

应使用静态系统。在某些特殊的情况下，比如水质指标变得不再适合受试生物或者影响化学平衡

时(例如：水中溶解的氧气含量过低，排泄物含量过高，或者从沉积物中析出的矿物质影响水的pH值或

硬度时)，也可使用半静态或流动系统：间断性或持续性地更新上部水体。尽管如此，通常情况下最好使

用其他的改善上部水体质量的方法，比如通风；而避免使用半静态或流动系统。

10．1．6饲料

应及时给幼虫投食，最好每天一次或者每周至少三次。对于最初10d内的小幼虫，每条幼虫

0．25

mg／d～O．5mg／d(C．yoshimatui应为0．35mg～o．5mg)的鱼饲料(一种水悬浮液或者磨碎的精

在余下的试验中，每条幼虫0．5mg／d～1．0mg／d应足够了。如果发现真菌生长或者对照中观察到死亡

率，则所有试验组和对照组中的饲料供给量应减少。如果不能停止真菌的生长，则试验应重做。当试验

强吸附物质(例如lgK。>5的物质)或者与沉淀物共价结合的物质时，应在陈化期前向配制沉积物中

加人足量的饲料以确保幼虫的生存和自然生长。对此，应使用植物性饲料替代鱼饲料。例如，加入

0．5％(干重)的磨细的植物叶子，叶子来源于刺荨麻(Ulticadioeca)、桑树(Morusalba)、白三叶草

(Trifoliumrepens)，菠菜(Spinacia

10．1．7孵化条件

10．1．7．1加入幼虫24h后要给试验容器中的上覆水柔和通风，并且保持到试验结束(应注意溶解氧

cm～3

的浓度不得低于ASV的60％)。通风是通过固定在沉积层之上2cm处的一根玻璃巴斯德吸管

进行的(即每秒1个或数个泡沫)。当试验挥发性化学物时，则不能给沉积物一水系统通风。

1x～1000

别是23℃和25℃士2℃。通常使用16h的光照周期，光照度应为500Ix。

10．1．8暴露时间

28d，c．tentans是65d后

d。如果蚊羽化较早，试验可在对照容器中最后一只成虫羽化之后的至少5

结束。

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10．2观察

10．2．1羽化

10．2．1．1

测定发育时间和完全羽化的雌雄蚊总数。从其羽状触角可轻易识别雄蚊。

10．2．1．2每周至少进行三次观察，与对照容器中的幼虫相比较，目估加标容器中的幼虫的任何反常行

为(例如离开沉淀物、非正常游动)。在预期的羽化期间，应每天对羽化蚊计数，每天记录完全羽化蚊的

性别和数量。经过鉴别之后，应把蚊从容器中移出。要记录试验终止前的所有产出的卵块，然后移出，

以防止幼虫再次引入沉积物。要记录能观察到的未能羽化的蛹数量。羽化的测量方法见附录D。

10．2．2发育和存活

如果需要幼虫10d的存活和发育资料，应在试验开始时，额外准备试验容器，以便在随后的试验

中，使用它们。使用250pm的滤网过滤从这些额外的试验容器中取出的沉淀物，滤出幼虫。对死亡的

界定是死去，或者对机械刺激没有反应。未能再找到的幼虫也要统计为死亡(那些在试验初期就死去的

幼虫可能已经被微生物分解)。测定每个试验容器中存活幼虫的干重(应无杂质)，计算每个试验容器中

的平均单个幼虫干重。确定存活的幼虫处于哪个虫龄是很有用的，为此，需要测量每个幼虫的头壳

宽度。

10．3分析试验

10．3．1受试物的浓度

10．3．1．1在试验开始(加入受试物质1h后更适宜)和结束时，应至少对最高浓度组和一个较低浓度

组中的上覆水、间隙水和沉积物样本进行测定；这些受试物质浓度的测定显示了水一沉积物系统中受试

化学物质的行为和分布情况。试验开始时沉积物的取样可能影响试验(例如取走试验幼虫)；因而，如果

适当，在试验开始和试验期间要使用另外的试验容器来做取样测定(见10．3．1．2)。在可比较的条件下

(例如沉积物与水的比率、应用种类、沉积物的有机碳含量)，如果在水／沉积物研究中，水和沉积物中受

试物质的分布情况可以被清楚地测定，则不必再测量沉积物中的受试物质浓度。

10．3．1．2当要做实验期间测量(例如第7d)，以及需要分析大量的样本时，样本的取出势必影响整个

试验系统，此时应采用额外的试验容器；这些额外的试验容器在与正式试验容器相同的条件下进行处理

(包括引入受试生物)，但不用来作生物学观察，仅用于从中进行取样分析。

000

10．3．1．3推荐用离心法分离间隙水，条件为：10g(g为自由落体加速度值)、4℃、30rain。但是，

如果能够证实受试物不被吸附在过滤器上，也可以用过滤法。在一些情况下，几乎不可能分析间隙水的

浓度，因为试样量太少了。

10．3．2理化参数

用适当方法测量试验容器中的pH和温度(见第7章)。在试验开始和结束时，应测量最高浓度的

一个试验容器以及对照容器中的硬度和氨度。

11数据和报告

11．1结果处理

”．1．1本试验的目的是要测定受试物对摇蚊发育速率和完全羽化的雌雄蚊总数的影响，或者在为期

10

d的试验中测定受试物对存活幼虫的数量和质量的影响。如果没有迹象显示摇蚊性别对统计灵敏

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度存在差异时，则雌雄的结果可以合并统计。灵敏度差异存在与否可用统计方法判定，例如x2-r×2

表检验。在为期10d的试验中，应测定幼虫存活数和每个容器中的平均个体干重。

11．1．2根据试验开始时测得的沉积物中受试物浓度来计算效应浓度，效应浓度应以干态质量为基础。

11．1．3为了计算EC”或其他EQ值，每个试验容器的统计数据值可当作真实的平行试验值。计算任

何EC，的置信区间时，应考虑这些数值之间的偏差，或者要证明偏差小到可以忽略不计。当适用最小

平方模式时，每个试验容器的统计数据值需通过转换来改善偏差的同质性。但计算E巳值时，应将响

应数据转换回原值。

更充分的试验”…。

11．2羽化率

11．2．1羽化率是离散数据，当剂量一效应关系预期为单向，并且这些数据也符合这一预期时，可用递减

差)，则应用充分的Cochr