WS/T 352-2011 丙氨酸氨基转移酶催化活性浓度测定(无磷酸吡哆醛)参考方法

ICs11,020

C50

中华人民共和国卫生行业标准

—ˉ

Ws/T352ˉ2011

丙氨酸氨基转移酶催化活性浓度测定

(无磷酸吡哆醛)参考方法

-phosphoricacid)

linotransFerase(Nopyridoxal-5’

alanineaⅡ

2011-09-30发布2012-04-01实施

中华人民共和国卫生部发布

Ws/T352-2011

目次

·

目刂舀………………………¨Ⅱ

…

1范围……………………·1

2规范性引用文件¨………………………·l

…

3术语和缩略语……………·……………1

3.1术语和定义·………………………¨1

3.2缩略语………·……………¨………2

…

4参考方法描述……·……………………3

4.1测定原理和方法………·……………3

¨…………···

4.2检查列表……………·

3

4.3试剂·………………·………………·4

4.4仪器…………………7

4.5采样和样本…………………………·7

4.6测定系统和分析部分的准备·…·………·¨………8

4.7酶催化活性浓度测定………………11

4.8测定结果处理………………………13

4.9分析可靠性…………………………14

4.10通过实验室间比对进行确认……………………·

1茌

4.11参考区间·…………………………14

…·

4.12报告…………¨………………15

……

4.13质量保证……·………………15

附录A(规范性附录)测定储存酶溶液中LD催化活性浓度…………16

附录B(资料性附录)试剂原料详细信息¨……………·19

附录C(觌范性附录)不同温度下溶液1、溶液2的pH值……………23

D(资)ALTIFCC37℃30℃…………·

附录料性附录参考方法与参考方法的比较25

…

……………·……………¨……

参考文献27

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Ws/T352-2011

丙氨酸氨基转移酶催化活性浓度测定

(无磷酸吡哆醛)参考方法

1范围

本标准规定了在临床医学应用中,测定丙氨酸氨基转移酶(ALT)催化活性浓度(无磷酸吡哆醛)的

参考方法。

本标准主要适用于参考实验室,作为丙氨酸氨基转移酶催化活性浓度(无磷酸吡哆醛)测定的溯源,也

可作为与酶活性浓度检验有关的仪器和试剂生产企业的溯源,可供有关认可单位及质量管理部门应用。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日引,仅所注日的

期的用文件期版本适用于本

。凡是不注日的引用,其最新版本(包)适。

文件期文件括所有的修改单用于本文件

ISo15193:⒛09体外诊断器具生物源样本中量的测定参考测定程序的表述

3术语和缩略语

3.1术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1.1

原始样本primarysample

最初从一个系统中取出的一个或几个部分的集合物,旨在提供该系统的信息或作为对该系统做出

决定的基础。

:在,所以,此样些的组成部。

注些下的可适于个较大的系或组系统时取系统是这系统分

某情况提供信息用一统一

3.1.2

实验室样本IaboratorysampIe

准备送到实验室或实验室接收的用于测定的原始样本或原始样本的分样本。

3.1.3

分析样本ana1yticaIsample

、。

自实验室样本制备的可从中取出分析部分的样本

注:在取出分析部分之前,分析样本可经过各种处理。

3.1.4

丿卜祠厅音阝分analyticalportion

从分析样本中取出的用于实际测定和观察的物质部分。

,需解析溶液

。下将分析部分溶成分

:如,分原样本实验室样本中取出某些情况

注不理直接从始或

果需预处析部分

再上机测定。

3.1.5

乡卜南厅攴analyticalsoIution

杵鼻讯

、固中而制的液,溶解过程中可以有反应发生或无反应发生。

将分析部分溶解在气体液体或体备溶

1

Ws/T352-2011

3.1.6

(某一物系)基system)

质统的质matrix(ofamateriaⅡ

一个物质系统中除被分析物之外的所有成分。

3.1.7

参考方法referenceproCedure

是在校准或表征标准物质时为提供测定结果所采用的测定方法,它适用于评定由同类量的其他测

定方法获得的被测定量值的测定正确度。

3.1.8

测定系统的灵敏度sensitivityofameasuringsystem

简称:灵敏度sensitivity

测定系统的示值变化除以相应的被测定值变化所得的商。

注1:测定系统的灵敏度可能与被测定的量值有关。

2:所必于测定系统的分辨力。

注测的变化须大

考虑的被定值

3.1.θ

specificity

土anaIyticaⅡ

乡卜南厅牛宁乒苹饣

测定方法只测定可测定的量的能力。

3.1.10

yticaIinterference

分析干扰anaⅡ

由一个影响量引起的系统测定误差,该影响量自身在测定系统中不产生信号,但它会引起示值的增

高或降低。

3.1.11

影响工imnuencequantity

被测定以外的可影响测定结果的量。

3.1.12

被测工measumnd

拟测定的量。

、状态的描述,包括有关成分及所涉及的

1:对种,以及含有该量的现象物体或物质

的明要求了解量的类

注被测定说

化学实体。

注2:在ⅥM第二版和IEC6005⒍300:2001中,被测定定义为受到测定的量。

、物质,使被测定的量可能不同于定

注3:测定包括测定系统和实施测定的条件,它可能会改变研究中的现象物体或

况下,适的正是必要的。

测。这种情当修

义的被定在

3.1.13

mitofdetection

限Ⅱmit,Ⅱ

检出detection

概为,声称物质成分存在的误

由给定测定方法获得的测得值,其声称的物质成分不存在的误判率卩

α

判概率为。

(IUPAC)推α的认值为0.05。

1:国理和应用化学联合会荐和卩默

注际论

注2:有时用缩写词LOD。

使

“”“”

注3:不要用术语灵敏度表示检出限。

3.1.14

校准品ca1ibrator

用于校准的测定标准。

3.2缩略语

下列缩略语适用于本文件。

2

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Ws/T352-2011

ALT:丙氨酸氨基转移酶(alanineaminotransferase)

LD:乳酸脱氢酶(lactatedehydrogenase)

NAD:氧化型阡烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(β

NADH:还型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(βamide~ade“

原阡nicot“

-磷(pyridoxa⒈

P-5-P:5’卩5-phosphoricacid)

比醛

酸哆

IFCC:国际临床化学与检验医学联合会

laboratorymedicine)

SoP:标法(standardoperationprocedure)

准操作方

4参考方法描述

4.1测定原理和方法

,⒈丙Ⅱ二ALT催化下,生成丙酮酸和L谷氨酸,丙酮酸在LD

本法采用偶联反应氨酸和酮戊酸在

催化下生成乳酸,同时NADH被氧化成NAD+,反应式如下:

⒈丙氨酸+2-酮戊二酸型工丙酮酸+⒈谷氨酸

丙酮酸+NADH+H∴≌挣1酸+NAD+

339nm下NADH的,摩的下速ALT催化活性浓度呈正比。

在,监测氧化速率尔消光系数降率与

4.2裣查列表

4.2.1试剂列表

将所用试剂按表1列出。

表1试剂列表

、

分类系统名称通用名称缩略语

三羟甲基氨基甲烷Tris

L(+)-丙氨酸丙氨酸

⒉二

⒉二,二钠盐,二水合物酮戊酸

酮戊酸

肛烟酰胺腺嘌呤二核苷酸,还原型,二钠盐还原辅酶I,NADH

无乳酸脱氢酶,LD

试剂叠氮钠无

盐酸无

氢氧化钠无

氨化钠无

牛血清白蛋白,FracoonV牛白蛋自

丙酮酸一钠盐无

(电(2us·

质量与双蒸水类似的高纯度水导率cm-!,

溶剂无

pH6~7硅L】)

酸盐<0.1mg·

(或)国的考物质无

参考物质JCTLM和家批准参

质控物质常规系统校准品无

指示剂无无

Ws/T352-ˉ2011

4.2,2分光光度计和辅助仪器列表

考验室应在表2登记主要测器(分光光)和主要(点pH计

参实定仪度计辅助仪器式温度计、天平、、

、配、)。

恒温水浴箱稀释液仪移液器等

表2分光光度计和辅助仪器

仪器名称生产厂家型号

分光光度计

点式温度计

天平

pH计

恒温水浴箱

稀释配液仪

移液器

4.3试剂

4.3.1试剂原料信息

按表3详细填写试剂原料详细信息。

表3试剂原料详细信息

试剂系统名通用名

信息指标内容

CAS,CARN注册号

生产厂家

货号/批号

分子式

相对分子质量

纯度

特定合格要求(如有)

危险度

贮存要求

失效期

ALT测定所用每个试剂原料详细信息见附录B。如怀疑一种化学药品含有不纯的物质影响了分

析物的催化活性,应进行进一步的研究,例如,比较不同厂家和不同批号的产品。宜使用在对比试验中

已经鉴定或认可的试剂。以下三种试剂需要注意安全:

盐酸健康危害:接触其蒸气或烟雾,可引起急性中毒,出现眼结膜炎,鼻及口腔黏膜有烧灼感,鼻衄、

,有可、膜炎等。眼和皮肤接触

、形成能引起胃穿孔腹

齿龈出血,气管炎等。误服可引起消化道灼伤溃疡

、蚀症及肤损害。操作人员必须

,引、气管炎牙齿酸皮

可致灼伤。慢性影响:长期接触起慢性鼻炎慢性支

经过专门培训,严格遵守操作规程。操作人员宜佩戴自吸过滤式防毒面具(全面罩),穿橡胶耐酸碱服,

、。

戴橡胶耐酸碱手套。远离易燃可燃物

4

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、Vs/T352-ˉ

2011

氢氧化钠有强烈刺激和腐蚀性。粉尘或烟雾会刺激眼和呼吸道,腐蚀鼻中隔;皮肤和眼与NaOH

;误服可道,黏、血。,遇和

直接接触会引起灼伤造成消化灼伤膜糜烂出和休克本品不会燃烧水水蒸气大

量放热,形成腐蚀性溶液。与酸发生中和反应并放热。具有强腐蚀性。(分解)产物:可能产生

燃烧有害

的毒性烟雾。呼吸系统防护:必要时佩带防毒口罩。眼睛防护:戴化学安全防护眼镜。防护服:穿工作

服(防腐材料制作)。手防护:戴橡皮手套。

叠氮钠:本品和氰化物相似,对细胞色素氧化酶和其他酶有抑制作用,并能使体内氧合血红蛋白形

,有显压。口

成受阻著的降作用对眼和皮肤有刺激性。如吸入、服或经皮肤吸收,可引起中毒死亡。高

血压人口服本品有显著降压用。本品在有机中可酸出,吸人后、

病作合成有叠氮气体逸中毒出现眩晕虚

、、、、压、心,应

弱无力视觉模糊呼吸困难昏厥感血降低动过缓等。呼吸系统防护:可能接触其粉尘时佩

戴头罩型电动送风过滤式防尘呼吸器。紧急事态抢救或撤离时,宜佩戴自给式呼吸器。眼睛防护:呼吸

系统防护中已作防护。身体防护:穿连衣式胶布防毒衣。手防护:戴橡胶手套。其他:工作现场禁止吸

、和。工,淋浴衣。独污的衣服,洗后。良的卫生习。

烟进食饮水作毕更单存放被毒物染备用保持好惯

皮肤接触:脱去被污染的衣着,用肥皂水和清水彻底冲洗皮肤。眼睛接触:提起眼睑,用流动清水或生理

盐水冲洗,就医。吸人:迅速脱离现场至空气新鲜处。保持呼吸道通畅。如呼吸困难,给输氧。如呼吸

停止,立即进行人工呼吸。就医。若误食:饮足量温水,催吐,就医。

4.3,2试剂溶液

4,3,2.1一般要求

制备溶液时各成分给出的质量是指100%含量。如果化学物质的含量低于100%E例如y(%)],则

:R。,计出出量相的某化学物质的质量。

应用因子nⅡnt=100/丿算与给质当

(电(2uS·cml,pH6~7,硅

溶液的制备应使用质量与双蒸水类似的高纯度水导率酸盐

(0.1mg·

Ll)。

每次称重的扩展(屁=2)不确定度(包括物质纯度的不确定度×正态分布),应≤1.5%。

4。3.2。2溶液1

5.61g丙(游0.052g叠

称量1.47gTos、氨酸离酸)及氮钠,将上述物质按以下步骤处理:

——80mL水

溶在约中;

——(37℃

用1mol·Ll盐调节pH值)至7,15;

酸

——至100mL容瓶中;

转移量

——20℃

将容量瓶和水平衡至;

——加水(20℃)至容量瓶的刻度线。

(游L1、

最配的液中Tris浓121。2mmol·Ll、丙氨酸离酸)浓度为630.Ommol·叠

终制溶度为

L1。2℃~8℃3个

氮钠浓度为8.00mmol·该溶液稳定性为月。

溶液2

s、0。052g叠以理:

称量1.47gTⅡ氮钠,将上述物质按下步骤处

——80mL水;

溶在约中

——Ll盐pH值(37℃7.15;

用1mol·酸调节)至

——至100mL容瓶中;

转移量

——⒛℃

将容量瓶和水平衡至;

——加水(20℃)至容量瓶的刻度线。~

Ll。2℃

Lˉ8。00mmol·该溶液

Tris浓121.2mmol·、浓

最终配制的溶液中度为叠氮钠度为

b

Ws/T352-2011

8℃稳定性为3个月。

溶液3

16.1mgNADH二盐,将上述物质按以下步骤处理:

称量钠

——2.00mL溶2中;

溶于液

——避光保存(如棕色瓶)。

NADH二11.34mmol·~8℃

最终配制的溶液中钠盐浓度为Ll。该溶液2℃稳定性为1周。

酶试剂的稀释液

1.zOg牛0.90gNaCl,将

称量血清白蛋白、上述物质按以下步骤处理:

——约SOmL水;

溶于中

——至100mL容瓶;

转移量

——至zO℃

将容量瓶和水平衡;

——加水(20℃)至容量瓶刻度线。

最配的Nacl浓154mmol·Lˉ。2℃~8℃1个。

终制溶液中度为该溶液稳定性至少月

溶液4

用中的酶试剂稀释液稀释LD储存液,使LD催化活性浓度在37℃时为3.57mkat·L1

(214.2kU·Lˉl),按(1)计LD储存液所需酶试剂稀释液体积:

公式算稀释

…………·····

‰=c。

式中:

V拥—LD储所需酶试剂稀释液体积,单位为毫升(mL);

u甘。n—稀释存液

VI~Dst。~LD储积,单为毫升(mD;

ck—存液体位

—(mkat·

LD“。LD储LD催化活性浓度,单位为毫凯塔尔每升L1)或千单位每

ck—存液中

升(kU·Ll)。

示例:见附录A。

l(214.2kU·

最终配制的溶液中LD催化活性浓度在37℃时为3.57mkat·LˉLl)。该溶液

2℃~8℃至少2d。

稳定性

反应溶液

10.OmL溶1、0。⒛0mL溶3、0。zOOmL水0.100mL溶4,将

分别移取液液、液上述溶液充分混

、。2℃~8℃1d。

匀避光保存该溶液稳定性为

起始试剂溶液

0。407g⒉二二二物,将上述物质按以下步骤处理:

称量酮戊酸钠水化合

——6mL水;

溶于约中

——至10mL容瓶;

转移量

——zO℃

将容量瓶和水平衡至;

——加水(20℃)至刻度线。

Lˉ1。2℃~8℃

⒉二二二水化合物浓度为180。Ommol·该溶液稳定

最终配制的溶液中酮戊酸钠

性为1周。

6

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Ws/T352-2011

4.3,3pH的

温度对缓冲溶液影响

pH值pH电人混液。然后将溶液边

当温度偏离37℃时,调节的方法:将温度计与极同时浸合中

pH值、pH的,搅速要一

搅拌边滴定至表中列举在当前测定温度下的。在校准控制和调节过程中拌度

。pH电液的中心。

致极应位于被搅拌溶

调pH的中,温度是可能改变的因素。为此,接近靶值时应重新控制温度,

应考虑到在节滴定过程

pH靶pH计调节。

如果需要,根据附录C调整值。同样的方法也适用于的温度补偿

pH值C来pH值

配制溶液1、溶液2时,需根据不同温度调整。参阅附录调节溶液的。

4.4仪器

分光光度计及辅助仪器主要性能的要求,见表4。

4、助器主要性能的要求

表分光光度计辅仪

仪器名称性能指标IFCC参考方法要求

波长准确度/nm339±1(龙=2)

、带宽/nm≤2

分光光度计配件

光径/mm10.00=±0.01(汔==2)

pH计pH值7.15=L0.05(尼==2)

点式温度计温度/℃37,0=L0.1(汔==2)

4.5采样和样本

4.5.1通则

参考实验室主要接受外检标本,不自行采血,一般不需考虑分析前因素对样本特性的影响。

4.5.2对收检样本的要求

宜以表格形式记录样本的详细信息,见表5。对不符合样本收检要求的样本应及时与委托方联系。

表5ALT收检样本要求

要求指标内谷

可接受样本种类□血清□血浆□其他

可接受样本类型□冻干粉□