DB51/T 2521-2018 蛙脑膜炎败血伊丽莎白菌病诊断技术规程

ICS65.150

B52

DB51

四川省地方标准

DB51/T2521—2018

蛙脑膜炎败血伊丽莎白菌病诊断技术规程

2018-07-23发布2018-08-01实施

四川省质量技术监督局发布

1

DB51/T2521—2018

目次

前言...............................................................................II

1范围..............................................................................1

2规范性引用文件....................................................................1

3术语和定义........................................................................1

4试剂和材料........................................................................1

5设备和器械........................................................................2

6临床检查..........................................................................2

7实验室样品采集....................................................................2

8细菌分离与纯化....................................................................2

9细菌鉴定..........................................................................2

10结果判定.........................................................................4

11综合判定.........................................................................5

附录A（规范性附录）试剂配方..................................................6

附录B（资料性附录）脑膜炎败血伊丽莎白菌16SrRNA基因参考序列（1450bp）............9

I

DB51/T2521—2018

前言

本标准依据GB/T1.1－2009给出的规定进行编写。

本标准中附录A为规范性附录、附录B为资料性附录。

本标准由四川省农业厅提出并归口。

本标准由四川省质量技术监督局批准。

本标准起草单位：四川农业大学。

本标准起草人：耿毅、陈德芳、郑李平、黄小丽、欧阳萍、白明焕、王世震。

II

DB51/T2521—2018

蛙脑膜炎败血伊丽莎白菌病诊断技术规程

1范围

本标准规定了蛙脑膜炎败血伊丽莎白菌病诊断的术语与定义、试剂和材料、设备和器械、临床检查、

实验室样品采集、细菌分离与纯化、细菌鉴定、结果判定和综合判定等技术规程。

本标准适用于牛蛙(Ranacatesdeiana)、美国青蛙(Ranagrylio)、虎纹蛙(Ranatigrinarugulosa)、

黑斑蛙(Ranagotiath)、棘胸蛙(Ranaspinosa)、林蛙(Ranasylvatica)等蛙类脑膜炎败血伊丽莎白菌

病的诊断。

2规范性引用文件

下列文件对于文件的应用时必不可少的。凡是注日期的应用文件，仅注日期的版本适用于本文件。

凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T4789.28食品卫生微生物学检测染色法、培养基和试剂

GB/T6682分析实验室用水规格和实验方法

GB/T18652致病性嗜水气单胞菌检测方法

SC/T7014水生动物检疫实验技术规范

SC/T7103水生动物产地检疫采样技术规范

3术语和定义

下列术语和定义适用于此文件。

3.1

蛙脑膜炎败血伊丽莎白菌病

是指由脑膜炎败血伊丽莎白菌(Elizabethkingiameningoseptica)感染引起的蛙类发病或死亡的

一种细菌性疾病。

3.2

BHIBrainHeartInfusion

脑心浸液琼脂培养基。

3.3

16SrRNA16SribosomalRNA基因

16S核糖体RNA基因。

4试剂和材料

4.1试剂、染色液与培养基

1

DB51/T2521—2018

按GB/T4789.28、GB/T18652与SC/T7014规定执行。Taq酶、dNTPs、10×PCR缓冲液（无Mg2+）、

DNA分子量标准参照物与核酸提取试剂盒等选用专业试剂公司提供的商品化试剂，上述未提及的见附录

A。

4.2水

应符合GB/T6682中一级水的规格。

4.3引物

16SrRNA基因DNA序列扩增引物，F：5′-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3′，R：5′-TACGGTTACCTT

GTTACGAC-3′，-20℃保存。

5设备和器械

主要设备与器械如下：

解剖盘、剪刀、镊子、手术刀、培养皿、铂耳、酒精灯、普通光学显微镜、电子天平、高压灭菌锅、

恒温培养箱、超净工作台、普通冰箱、高速冷冻离心机、微量移液器、PCR扩增仪、离心管和PCR管、水

平电泳系统和凝胶成像系统等。

6临床检查

6.1临床症状

病蛙体色发黑，厌食懒动，运动机能失调，头部歪斜，游动失去平衡或浮于水面间隙性旋转。

6.2外部检查

病蛙眼角膜发白，呈“白内障”表现，肛门红肿；四肢肿胀，后肢内侧充血、出血发红，腹部膨胀；

部分病蛙体表出现溃疡。

6.3剖检