DB37/T 4754.1-2024 动物疫病鉴别检测技术 第1部分：猪瘟强毒与猪瘟疫苗弱毒

ICS11.220

CCSB41

37

山东省地方标准

DB37/T4754.1—2024

动物疫病鉴别检测技术第1部分：猪瘟强

毒与猪瘟疫苗弱毒

Animaldiseaseidentificationanddetectiontechnology—Part1:Classicalswinefever

virulentstrainandvaccinestrain

2024-09-03发布2024-10-03实施

山东省市场监督管理局发布

DB37/T4754.1—2024

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定

起草。

本文件是DB37/T4754《动物疫病鉴别检测技术》的第1部分。DB37/T4754已经发布了以下部分：

——第1部分：猪瘟强毒与猪瘟疫苗弱毒。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

本文件由山东省畜牧兽医局提出并组织实施。

本文件由山东省畜牧业标准化技术委员会归口。

I

DB37/T4754.1—2024

引言

动物疫病是影响山东省畜牧业健康发展的重要因素之一。不同病原或者相同病原的不同血清型/基

因型引起疫病的临床病症具有一定程度的相似性，一些疫病弱毒疫苗的使用也干扰了病原的检测。动物

疫病鉴别检测技术标准的建立，规定了对不同病原、相同病原的不同血清型/基因型以及弱毒疫苗株的

鉴别检测，为山东省动物疫病精准防控提供了技术支持，对于促进畜牧业健康发展具有重要意义。

猪瘟病毒（Classicalswinefever，CSFV）属于黄病毒科瘟病毒属成员，是引起猪瘟的病原体。

猪瘟严重危害养猪业，世界动物卫生组织将其列为必须通报的动物疫病之一，我国将其列为二类动物传

染病。猪是猪瘟病毒的唯一宿主。在自然条件下，病毒经口腔和鼻腔途径进入宿主，也可通过损伤的皮

肤或伤口感染，感染的猪在潜伏期便可排出病毒，病毒随病猪的分泌物和排泄物污染的饲料和饮水进入

机体。我国从20世纪50年代便开始广泛应用兔化弱毒疫苗做预防注射，在控制猪瘟中起到重要的作用，

随着养猪业的不断发展，集约化养猪场规模越来越大，国内生猪的交易和流通日趋频繁，给猪瘟的防制

带来了挑战。各地猪瘟仍时有发生，而且多表现为非典型、慢性及隐性状态，并出现猪瘟病毒的持续感

染和妊娠母猪带毒综合征。这给兽医临床诊断带来了很大困难。中国猪瘟弱毒疫苗的全面应用，使生猪

携带猪瘟疫苗毒成为常态，导致常规的猪瘟病毒核酸检测难以区分猪瘟病毒的强毒感染和免疫接种的疫

苗弱毒，迫切需要建立一种快速、特异的标准技术来区分猪瘟强毒和猪瘟疫苗弱毒，为保障我省养猪业

的健康发展发挥引领和示范作用。本标准制定后，作为《动物疫病鉴别检测技术》的1部分，《动物疫

病鉴别检测技术》拟由以下部分构成。

——第1部分：猪瘟强毒与猪瘟疫苗弱毒。目的在于规范猪瘟强毒与猪瘟疫苗弱毒SYBRGreenI

荧光RT-PCR鉴别检测技术的操作，便于检测技术在猪瘟临床诊断、流行病学调查、检验检疫、

猪瘟疫苗质量控制等方面的稳定应用。

——第2部分：兔出血症病毒经典型与兔出血症病毒2型。目的在于规范兔出血症病毒经典型与

兔出血症病毒2型实时荧光RT-PCR鉴别检测技术的操作，便于检测技术在兔瘟临床诊断、流

行病学调查、检验检疫等方面的稳定应用。

——第3部分：禽腺病毒Ⅰ群与禽腺病毒Ⅲ群。目的在于规范禽腺病毒Ⅰ群与Ⅲ群PCR鉴别检测

技术的操作，便于检测技术在禽腺病毒病临床诊断、流行病学调查、检验检疫等方面的稳定

应用。

II

DB37/T4754.1—2024

动物疫病鉴别检测技术第1部分：猪瘟强毒与猪瘟疫苗弱毒

1范围

本文件规定了猪瘟强毒与猪瘟疫苗弱毒SYBRGreenI荧光RT-PCR鉴别检测。

本文件适用于猪瘟强毒与猪瘟疫苗弱毒的鉴别检测。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB19489实验室生物安全通用要求

NY/T541兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范

3术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

4试验原理

本文件通过特异性引物，在RT-PCR反应体系中扩增出了猪瘟疫苗弱毒126bp及猪瘟强毒335bp的目

的产物，当SYBRGreenI荧光染料与扩增产物结合时，荧光信号增强，从扩增产物上释放出来时，荧光

信号急剧减弱，不同DNA扩增产物，Tm值不同，通过Tm值的差异及荧光信号的变化实现了猪瘟疫苗弱毒

与猪瘟强毒扩增产物的鉴别。

注：SYBRGreenI是一种只与双链DNA小沟结合的染料。

5试剂和材料

除非另有说明，仅使用分析纯试剂。

水：GB/T6682，一级。

焦碳酸二乙酯（DEPC）水。

取1mLDEPC加入水至1000mL，充分震荡混匀，静置24h后，121℃高压灭菌15min，2℃～8℃保

存备用。

磷酸盐缓冲溶液（PBS）。

取Na2HPO4.12H2O2.9g，KCl0.2g，KH2PO40.2g，NaCl8g，溶于800mL水中，充分搅拌溶解，滴

加浓盐酸将pH调节至7.4，加水定容至1000mL，121℃高压灭菌15min，2℃～8℃保存备用。

氢氧化钠溶液（3%）。

称取3g氢氧化钠，溶于少量水中，放置室温后，加水定容至100mL。

乙二胺四乙酸（EDTA）溶液（4%）。