DB22/T 2972-2019 羊泰勒虫病病原检测 PCR法

ICS11.220

B41

DB22

吉林省地方标准

DB22/T2972—2019

羊泰勒虫病病原检测PCR法

PCRassayfordetectionoftheileriaovis

2019-05-27发布2019-06-17实施

吉林省市场监督管理厅发布

DB22/T2972—2019

前言

本标准按照GB/T1.1-2009和GB/T20001.4-2015给出的规则起草。

本标准由吉林省畜牧业管理局提出并归口。

本标准起草单位：延边大学、吉林农业科技学院、吉林省动物疫病预防控制中心。

本标准主要起草人：贾立军、田万年、柴方红、梁晚枫、陈健、王海军、王欣睿、李国峰。

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DB22/T2972—2019

羊泰勒虫病病原检测PCR法

1范围

本标准规定了羊泰勒虫病病原PCR检测方法原理、试剂和仪器、样品采集、操作步骤和判定结果。

本标准适用于绵羊泰勒虫病病原检测。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

3原理

双链DNA在高温加热的作用下变性解旋成单链，在DNA聚合酶的参与下，根据碱基互补配对原则，通

过人工合成的特异性寡核苷酸引物与单链DNA模板中的一段互补序列结合，形成部分双链，再利用反应

混合物中的四种脱氧核苷三磷酸(dNTPs)合成新生的DNA互补链，进而完成特定片段的体外扩增。

4试剂和仪器

4.1试剂

除特别说明以外，本标准所用试剂均为分析纯，实验用水符合GB/T6682中一级水的要求。

4.1.1血液DNA提取试剂盒。

4.1.210×PCR缓冲液。

4.1.3dNTP（dATP、dCTP、dGTP、dTTP），浓度2.5mmol/L。

4.1.4TaqDNA聚合酶，浓度5U/μL。

4.1.550×TAE缓冲液见表A.1。

4.1.610mg/mL溴化乙锭见表A.2。

4.1.71%琼脂糖凝胶见表A.3。

4.1.8加样缓冲液见表A.4。

4.1.9阴性对照为健康绵羊血液DNA提取物。

4.1.10阳性对照为羊泰勒虫感染的绵羊血液DNA或含有目的片段DNA序列，DNA序列参见附录B。

4.1.11空白对照为灭菌双蒸水。

4.1.12DNAMarker分子量标准。

4.2耗材

4.2.1抗凝管。

4.2.2吸头（200μL～1000μL、20μL～200μL、2μL～20μL、0.5μL～10μL）。

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DB22/T2972—2019

4.2.3Eppendorf管（1.5mL、0.5mL、0.2mL）。

4.2.4PCR反应管。

4.2.5三角瓶。

4.3引物

引物序列与浓度见表1。

表1引物序列与浓度

引物引物序列长度/bp基因序列浓度/μmol/L

P1（上游引物）5'-TGATGAGTTGATGTATTGTGGC-3'18SrRNA