LY/T 1181-1995 苏云金芽孢杆菌制剂

Ly

中华人民共和国林业行业标准

LY/T1181一95

苏云金芽抱杆菌制剂

1995一06一22发布1995一12一01实施

中华人民共和国林业部发布

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中华人民共和国林业行业标准

LY/T1181一95

苏云金芽抱杆菌制剂

1主皿内容与适用范围

本标准规定了苏云金芽袍杆菌制剂产品的技术要求、检验方法、验收规则、包装、标志、贮存和运输。

本标准适用于以苏云金芽抱杆菌(B1)经工业发酵而制成的苏云金芽抱杆菌制剂。

本标准不适用于加有化学农药的苏云金芽抱杆菌复合制剂。

2引用标准

GB1601农药氢离子浓度测定方法

GB1604农药验收规则

GB1605商品农药采样方法

GB3796农药包装通则

GB5451农药可湿性粉剂湿润性测定方法

HG2-896农药粉剂细度测定方法

3技术要求

1剂型

粉剂、可湿性粉剂、悬浮剂。

2夕卜观

粉剂及可湿性粉剂外观呈灰白色或浅褐色粉末状，悬浮剂为棕黄色至褐色稠状液体。

3生物指标(见表1)

表1

指标

指标名称粉剂可湿性粉剂悬浮剂

一等品二等品一等品二等品一等品二等品

毒力效价

160080016000800080004000

(DPIU/mg)

注:DP为DendrolimusPunctatus马〔尾松毛虫)的缩写.

3.4理化指标(见表2)

表2

指标

指标名称

粉剂可湿性粉剂悬浮剂

pH5.0-8.05.0-8.04.5-6.5

顺粒细度98%过100目筛95瑞过200目筛95叭过200目筛

中华人民共和国林业部1995一06一22批准1995一12一01实施

1

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续表2

指标

指标名称

粉剂可湿性粉剂悬浮剂

含水率，%C55

密度，g/cm'0.3-0.60.3-0.61.1-1.4

悬浮率(有效成分)，%妻5050

湿润时间，5(120

检验方法

4.1采样

按GB1605进行取样。

4.2感官检验

取样品放于干净的试管中，以肉眼直接观察其颜色性状。

4.3生物及理化检验

4.3.1生物效价测定

4.3.1门供试虫种

室内饲养的马尾松毛虫(DendrolimusPunctatus),

幼虫的饲养

马尾松毛虫幼虫孵出后，在相对湿度75%-85%,温度为25-28'C(当日均温)的养虫室内饲养，光

照强度1000--4000Ix，光照时间16h/d,

4.31.2.，幼虫的接入方法

将收有卵块的马尾松枝叶放人直径16cm、高20cm的培养缸内，上面以2层纱布用橡皮圈扎上。

在卵孵化高峰期，饲养缸内放入新鲜马尾松枝叶，每日用新洁尔灭C(1八000)消毒过的用具清除虫粪，并

换上新鲜枝叶饲养幼虫。当幼虫生长到二至三龄时，移入养虫笼进行饲养石养虫笼由40cmX45cmX

40cm的木制骨架构成，前后两面上窗纱，左、右及上面镶上玻璃，用木板封底。幼虫生长7^10天以二龄

幼虫为主;10^-15天以三龄幼虫为主。应以饲养生理状态一致的健康幼虫作为质量检测的供试虫。

.2蛹的收集

用带橡皮头的镊子从松枝叶上轻轻取下成熟的蛹茧放人养虫笼内，使其羽化。每笼约30头。

.3成虫的饲养和产卵

将饱含100o葡萄糖溶液的脱脂棉球挂入成虫饲养笼中，供成虫取食，每天更换一次棉球。同时放入

2只250mL三角瓶水培的新鲜马尾松枝叶，做为成虫产卵的场所。蛹羽化后，成虫当天或次晚交配，历

时7h以上即可完成受精作用并产卵。卵期约7天左右开始孵化，7^10天为卵的孵化高峰期。

感染方法

称取新鲜马尾松针叶5g,授沾供试样品并晾千后，放入消毒过的500mL三角瓶中，用一层纱布将

瓶口扎上。同样浸沾燕馏水(含有。.1%吐温-80)者作对照。分别各放入30头供试虫种(三龄幼虫).由

昆虫取食感染，在28士1℃室温条件下，经72h检查幼虫死亡情况。死亡的判断标准以用镊子轻轻触动

无任何反应者判为死亡。统计死亡率按式((1)，如对照有死亡按式((2)进行校正，对照死亡率不超过

10%.

样品稀释

.1标准品(效价18OOOIU/mg;16OOOIU/mg)

准确称取标准品100mg精确到。.1mg)，放入250mL装有10粒玻璃珠的磨口三角瓶中，然后再

加入准确量取的20mL蒸馏水(含。.1%吐温-80)。在旋涡振荡器上振荡10min，此液为浓度5mg/mL

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的标准母液，用10倍和2倍稀释法将标准母液稀释成浓度为500,250,125,62.5,31.25,15.625pg/mL

的六个稀释度。

4.3-1-4.2待测样品

粉剂和可湿性粉剂的待测样品参照标准品的配制方法配制感染液。悬浮剂采用称重法取样并参照

标准品的配制方法配制感染液。或通过预备试验，估计Lc”的范围来选择稀释度，但不同浓度的试验剂

量不得少于5个。

结果统计

计算死亡率及校正死亡率(用Abbott公式进行校正)

处理组死虫数

死亡率(%)=处理组死虫数+活虫数水100”··”···········……(1)

对照组生存率一处理组生存率

校正死亡率(%)=X100··……。……(2)

对照组生存率

4.3-1.5-2Lc,.(致死中浓度)的计算

将浓度(剂量)换成对数值，死亡率换成机率值，用最小二乘法的演算公式使用计算器或按编定的

BASIC计算程序将数据输入微机进行结果运算。生物测定结果运算的计算机程序见附录A(参考件)。

用最小二乘法求供试样品毒力直线回归式，按式(3):

Y=a+bX(3)

XX'XY一XXXXY

a今-NXX2一丈EX),(4)

*=NXXY-XXXY(5)

NXX‘一(FX)`

式中:Y—死亡率机率值;

X-浓度对数值;

N剂量的组数，N=5,

.3相关系数r的计算

人n

(6)

r一LxxLyy

L。二XXY一(IX)(XY)/n(7)

Lxx二XX2(XX)2/n(8)

L,.,.=艺yZ(EY)'/n(9)

式中:r-相关系数;

九—试虫数。

4.X'检验

通过X'验证Ln-P线所得Lm的可信性。

X:值=(T一刀尸)2(10)

np(1一尸)

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式中:二—观察值;

。一昆虫数‘

尸—死亡率;

nP—死亡率计算值。

求出X}值后查X}表，证明这一直线的回归式是否符合实际情况。如按自由度为4，置信度95%,

查X“表知X“值为9.448，大于所求得的X“值，证明这一直线的回归式符合实际情况。

4.3.，.5.5标准误差和95%置信限

标准误差按式(11)计算:

s_一一1…..…价…(n)

b了lnW

式中:Sm—标准差;

b—Lo-P的坡度;

n—试虫数;

w—每一机率值的权系数。

求出S。后即可求出众5。的置信限为及.。士1.96XSmo

.6检品效价

检品效价按式(12)计算:

检品效价((IU/mg)二标准品LM.X标准品效价(IU/m妇········……(12)

供试样品1C50

式中IU为国际单位。

4.3.2PH值测定

按引用标准GB1601农药氢离子浓度测定方法中的pH试纸法进行。

4.13含水率测定

粉剂和可湿性粉剂取样时一次取足，不得缩分。取样量不得少于200g，保存于磨口容器中，测定时

从中再称取5g样品(称准至。.01g),置于对流的干操箱中。在11012℃烘干4h至恒重，取出后放入

干燥器中冷却至室温，取出立即称重。

含水率按式(13)计算:

一

w一Go二G‘,X:。。

U。

式中:W—样品的含水率，%r

G烘干前样品重，9;

G—烘干后样品重，9。

在同批同次取样品重复三次，取其算术平均值，此值应精确到0.1%0

4.3.4细度测定

按HG2-896进行。

4.3.5湿润时间测定

按GB5451进行。

4.3.6密度测定

仪器

.1密度计。

.2量筒:500mL,

4.3-6.2操作步骤

在20℃的条件下，将样品沿玻璃棒慢慢地注入清洁干燥的量筒中，不得使试样产生气泡和泡沫，拿

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住密度计表上端，将其慢慢地放入试样中，注意不要接触筒壁。当密度计在样品中停止转动后，记下液面

上边缘的数据，精确到。.001，平行测定三次，计算平均值，即为样品的密度。平行测定结果之差不得超

过0.005.

粉剂、可湿性粉剂的密度测定为物体的重量和其体积的比值，即为样品的密度。

4.3.7悬浮率测定

4.3-7.1仪器和试剂

4.3-7.1.1量简:250ml具塞、0和250刻度间距离为20^21.5cm,250ml刻度线与塞子底部之间

的距离为4-6cm,

.2吸移管:长30^-40cm，内径0.5cm，末端内径为。.3cm，并将其弯成U形，U形部分不高

于。.5^-1.0cm，其管口向上.

.3秒表、三角玻瑞瓶(100ML),恒温水浴锅。

4.3-7-1.4标准硬水:以磅截钙计，具有342PPM硬度，其配制方法按GB5451中标准硬水配制方法

进行。

4.37.2测定步骤

.1可湿性粉剂佯品测定步骤

称取样品220m‘放入盛有玻璃珠的三角瓶中，加入标准硬水270ml，用手左右振荡60次，从中吸

取250ml至250ml,具塞量简中。将量简放入30士1'c恒温水浴中，当悬浮液温度达30C时，将量简盖

好，拿起量简先轻轻摇动沉淀物，然后有规律地以盘筒中部为中心上下颠倒15个来回(约30s).使呈均

匀的悬浮液，量简仍放入恒温水浴中，打开盖子静置30min后，用吸管以抽气法将量简上部9/1。的悬

浮液抽出(在15-30s内完成)。抽液过程中吸液管应依附简壁随液面下降而下降，勿使下部沉淀搅动，

量简内剩下1/10部分，加50mL标准硬水，按4.3.1生物效价测定法测定毒力。

.2悬浮剂样品测定步骤

样品摇匀后吸取5ml-(精确到。.01mL)于100ml三角瓶中，加入标准硬水45ml，用手左右振荡

50次，从中吸取2.5ml.于量简中，并稀释至250ml刻度。将量简放入30士1'C恒温水浴中，当悬浮液

温度达30'C时，将徽简盖好，拿起量简先轻轻摇起沉淀物，然后有规律地以量简中部为中心上下颇倒IS

个来回(约30s),使呈均匀的悬浮液。It筒仍放人恒温水浴中，打开盖子，静置30min后，用吸管以抽气

法将量简上部9/10的悬浮液抽出(在15^-30s内完成)。抽液过程中吸液管应依附简壁随液面下降而

下降，勿使下部沉淀物搅动，量简内剩下1/1。部分，按4.3.1生物效价测定法测定毒力。

计算

根据式(14)计算悬浮率:

111(C一Q)

悬浮率(%)二(14)

C

可湿性粉剂样品:

所取样品的毒力(IU)

火250

270

悬浮剂样品:

所取样品的毒力((IU)

X2.5(16)

50

式中:Q—留在量筒的25mL悬浮液的毒力(IU)

本法允许偏差，但三次重复测定结果误差不得超过20%e

验收规则

采样

按GB1605进行。生产单位的质量检验部门按照产品标准进行检验，生产单位应保证出厂产品均

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符合本标准第3章质量要求的指标。

5.2供需双方对产品质量如有争议，可协商进行复查。如再有净议，需要仲裁时，可由双方协商选定仲

裁机构。仲裁时，应按照本标准规定的验收方法进行仲裁分析，所需费用由责任一方负担。

6标志、包装、运输和贮存

6.1标志

包装应符合GB3796规定，在包装容器上应标明注册商标、产品名称、生产日期、批号、净重、等级、

保存期、农药登记证号和标准编号、贮运标志、厂名、厂址，包装内附产品合格证、使用说明韦，小包装应

印有条码。

62贮存

6.2.1粉剂和可湿性粉剂

置于通风干燥处，严防潮湿及日晒。粉剂和可湿性粉剂保存期2年。在正常贮运条件下1年内产品

毒力效价不低于3.3条指标的80%;2年内产品毒力效价不低于3.3条指标的70%,

6.2.2悬浮剂

在正常贮运条件下有效期为1年，在1年内产品毒力效价不低于3.3条指标的60%,

6.3运输

防雨、防潮、防日晒，小心轻放，不能与化学杀菌剂、酶制剂混运。苏云金芽抱杆菌制剂各种剂型对

人、畜均安全。

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附录A

生物测定结果运算的计算机程序

(参考件)

10S二。:D=0:P=0:C二。:H=0:G=0:T二2.09

20INPUT"X,Y,W=",X,Y,W:IFX=10AND

Y=10ANDW二10THEN110ELSE

IFX二20ANDY=20ANDW=20THEN130

30S=S+X:D=D+X"X:P=P+Y:C=C+X+Y:H=H十Y-Y:G=G+7-W

40A=(D，P一S.C)/(7，D一S，S):

B=(7.C一S-P)/(7"D一S;S)

50F=(5一A)/B:L=10AF

60SM二1/(B-SQR(G)):N=T-SM

700=C-S，P/7:M=D-S，S/7:K二H一PxP/7:U=M，K

80R=0/SQR(U)

90X,=F+N:X}二F一N:D,=IOAX,:D,=10AXz

100GOTO20

110PRINT"A="A,"B二”B,"L二”L,"R="R,"D,="D"D:二"D:

120GOTO10

13oEND

此程序包括数据的统计学处理和最终的结果计算。运行程序后，计算机将给出毒力曲线回归方程、

相关系数(r),L:5o(致死中浓度)、标准误差和95%贵信限。

附加说明:

本标准由林业部科技司提出。

本标准由中国林科院亚林所负责起草。

本标准主要起草人李玉萍、赵路。

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