GB/T 23411-2009 蜂王浆中17种喹诺酮类药物残留量的测定 液相色谱-质谱/质谱法

ICS67.050

B47

中华人民共和国国家标准

GB/T23411—2009

蜂王浆中17种瞳诺酮类药物残留量的测定

液相色谱-质谱/质谱法

Determinationofresiduesof17quniolonesinroyaljelly—

LC-MS/MSmethod

2009-03-28发布2009-07-01实施

发布

GB/T23411—2009

_LX.—1—

刖5

本标准的附录A、附录B、附录C和附录D为资料性附录。

本标准由中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局提出并归口。

本标准起草单位：中华人民共和国江苏出入境检验检疫局。

本标准主要起草人：丁涛、徐锦忠、吴斌、刘艳、张嬪、郭玲、蒋原、陶宏锦。

I

GB/T23411—2009

蜂王浆中17种唾诺酮类药物残留量的测定

液相色谱■质谱/质谱法

1范围

本标准规定了蜂王浆中恩诺沙星（简称ENR,下同），环丙沙星（简称CIP,下同），诺氟沙星（简称

NOR,下同），氧氟沙星（简称（）FL,下同），双氟沙星（简称DIF,下同），氟甲座（简称FLU,下同）、沙拉

沙星（简称SAR,下同），司帕沙星（简称SPA,下同），丹氟沙星（简称DAN,下同），氟罗沙星（简称

FLE.下同），马波沙星（简称MAR.下同），伊诺沙星（简称ENO,下同），奥比沙星（简称（）RB,下同），毗

哌酸（简称PIP,下同），培氟沙星（简称PEF,下同），洛美沙星（简称L（）M,下同）和蔡睫酸（简称NAL,

下同）17种座诺酮残留量的液相色谱-质谱/质谱的测定方法。上述17种座诺酮类药物中英文名称、结

构式、CAS号和相对分子质量参见附录A。

本标准适用于蜂王浆中座诺酮类残留量的测定。

2规范性引用文件

下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有

的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究

是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（GB/T6682—2008,ISO3696；1987,MOD）

3方法提要

蜂王浆样品用氢氧化钠溶液溶解后，阴离子交换柱富集和净化，利用液相色谱-串联质谱仪测定，优

化选择二级质谱碎片，内标法定量。

4试剂和材料

除非另有说明，所有试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。

4.1甲酸（85%）。

4.2甲醇：HPLC级。

4.3氢氧化钠。

4.4阴离子交换柱（PAX）：500mg,6mL,或相当者。

4.5座诺酮类标准品：ENR、CIP、N（）R、（）FL、DIF•HC1.SAR•HC1、SPA、DAN、FL、FLE、MAR、

EN（）、（）RB、PIP、PEF、L（）M和NAL,纯度》99%。

4.6氛代诺氟沙星（简称N（）R-D,下同）：纯度$99%。

4.7座诺酮类标准储备溶液：1.0mg/mL0准确称取适量的唾诺酮类标准物质（4.5）,用甲醇（4.2）溶

液配成1.0mg/mL的标准储备液。储备液贮存在4C冰箱中，可保存6个月。

4.8座诺酮类标准工作溶液:用甲醇-水（2+8,体积比）分别配成浓度范围为1ng/mL〜50ng/mL标

准工作溶液，其中内标为50ng/mL,现配。

4.9内标溶液（NOR-DJ：用甲醇（4.2）配制浓度为1Mg/mL内标溶液，内标溶液在4I保存。

4.10氢氧化钠溶液（0.1mol/L）:取4g氢氧化钠，溶解于1L水中。

4.11甲酸-甲醇溶液（5+95,体积比）：取5mL甲酸（4.1）,溶解于95mL甲醇（4.2）中。

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GB/T23411—2009

4.12甲醇-水(2+8,体积比)：量取20mL甲醇(4.2)于80mL水中，混合均匀。

5仪器和设备

5.1液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源。

5.2分析天平：感量0.1mg和0.01g各一台。

5.3固相萃取装置。

5.4旋转蒸发仪或相当者。

5.5涡旋混匀器。

5.6真空泵：真空度不低于80kPao

5.7高速离心机：转速不低于6000r/mino

5.8移液器。

5.9塑料管：50mLo

5.10滤膜：有机相,0.45Mmo

6试样的制备与保存

6.1试样的制备

将实验室样品搅拌均匀，分出0.5kg作为试样。制备好的试样置于样品瓶中，密封，并做上标记。

在制样的操作过程中，应防止样品污染或发生残留含量变化。

6.2试样的保存

将试样于冷冻状态下保存(一18°C)。

7测定步骤

7.1提取

准确称取2g蜂王浆(精确到0.01g)试样，置于50mL具塞离心管中，准确加入同位素内标溶液

(4.9)50卩L,涡旋10s,加入10mL氢氧化钠溶液(4.10)，涡旋1min,8000r/min高速离心5min,过

滤于干净的50mL离心管中。用6mL甲醇、6mL水活化固相萃取柱(4.4),将样品滤液过柱，再用

6mL水洗涤固相萃取柱,抽近干，6mL甲酸-甲醇(4.11)洗脱，收集洗脱溶液。40°C水浴旋转蒸发干，

用甲醇-水(4.12)1.0mL定容，过滤到进样瓶中，供液相色谱-串联质谱仪测定。

7.2测定

7.2.1液相色谱条件

a)色谱柱：Cis,3^m,150mmX2.1mm(内径)或相当者；

b)流动相：甲醇+0.1%甲酸水溶液；

c)流速：0.20mL/min；

d)梯度洗脱程序:参见附录B；

e)柱温：室温；

f)进样量:25卩L。

7.2.2串联质谱条件

参见附录C。

7.3液相色谱-质谱测定

7.3.1定性测定

进行样品测定时,如果检出的质量色谱峰保留吋间与标准样品一致，并且在扣除背景后的样品谱图

中，各定性离子的相对丰度与浓度接近的同样条件下得到的标准品谱图相比，最大允许相对偏差不超过

表1中规定的范围，则可判断样品中存在对应的被测物。

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GB/T23411—2009

表1定性确证时相对离子丰度的最大允许相对偏差

相对离子丰度>50%>20%〜50%>10%〜20%<10%

允许的相对偏差±20%±25%±30%±50%

7.3.2定量测定

标准工作溶液（4.8）在液相色谱-串联质谱设定条件下分别进样，以标准与内标物峰面积比值为纵

坐标,工作溶液浓度（ng/mL）为横坐标，绘制标准工作曲线（1ng/mL〜50ng/mL）,用标准工作曲线对

样品进行定量，样品溶液中座诺酮类的响应值均应在仪器测定的线性范围内。在上述色谱条件下，其相

应的标准物质和内标离子流色谱图参见附录D。

7.4空白试验

除不加入试样外，按上述（7.1〜7.3）步骤进行。

8结果计算

结果用色谱数据处理机或按式（1）计算：

=入X叫（1）

―AsXm（1）

式中：

•——样品中座诺酮类药物的浓度，单位为微克每千克Jg/kg）；

——样品中座诺酮类药物的峰面积与相应内标峰面积比值；

叫座诺酮类药物标准的质量，单位为纳克（ng）；

As——标准品中座诺酮类药物的峰面积与相应内标峰面积比值；

m样品质量，单位为克（g）。

9检测低限、回收率范围和精密度

本标准中蜂王浆中17种座诺酮类药物测定低限为2.5Mg/kgo

蜂王浆中座诺酮类药物添加浓度及回收率范围（内标校正）的试验数据（”=10）：

添加水平为2.5Mg/kg,17种座诺酮类回收率范围为67%〜113%；

添加水平为5.0Mg/kg,17种座诺酮类回收率范围为65%〜107%；

添加水平为10.0Mg/kg,17种座诺酮类回收率范围为64%〜103%。

在2.5卩g/kg、5.0ptg/kg和10.0卩g/kg添加水平上，相对标准偏差（RSD）为4.0%〜6.0%。

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GB/T23411—2009

附录A

（资料性附录）

唾诺酮类药物及其代谢物中英文名称、化学结构式、CAS号和相对分子质量

表A.1隆诺酮类药物及其代谢物中英文名称、化学结构式、CAS号和相对分子质量

序号中文名称/英文名称/简称化学结构式相对分子质量CAS号

恩诺沙星

1Enrofloxacin35993106-60-6

(ENR)

戈

环丙沙星

2Ciprofloxacin